姜黄素抑制游离二氧化硅诱导小鼠肺泡巨噬细胞NLRP3炎性小体活化机制

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的探究姜黄素抑制游离二氧化硅（SiO2）诱导的小鼠肺泡巨噬细胞（AM）内核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3（NLRP3）炎性小体活化的分子机制。方法取自无特定病原体C57BL/6小鼠支气管肺泡灌洗液中分离的AM分为6组;其中,对照组AM不予任何刺激;SiO2刺激组AM予终质量浓度为50 mg/L的游离SiO2混悬液刺激;核转录因子-κB（NF-κB）抑制组AM予终浓度为200 nmol/L的5-（4-氟苯基）-2-脲基噻吩-3-甲酰胺预处理1 h,姜黄素低、中、高剂量组AM分别予终浓度为20、40、50μmol/L的姜黄素预处理1 h,其后均以终质量浓度为50 mg/L的游离SiO2混悬液刺激。孵育6 h后收集样品,以实时荧光定量聚合酶链式反应法检测细胞内NLRP3炎性小体相关基因NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）和白细胞介素（IL）-1β的mRNA表达;以酶联免疫吸附实验检测AM中成熟IL-1β（mIL-1β）和IL-18分泌水平;以免疫印迹法检测各组细胞中Caspase-1剪切体（cleaved Caspase-1）、IL-1β前体（pro-IL-1β）、mIL-1β蛋白的表达和分泌水平。结果与对照组比较,SiO2刺激组AM中NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA相对表达水平和mIL-1β、IL-18分泌水平,cleaved Caspase-1、pro-IL-1β、mIL-1β蛋白的相对表达水平与cleaved Caspase-1、mIL-1β蛋白的分泌水平均升高（P2刺激组（P2刺激组（P2诱导AM的NLRP3炎性小体活化,呈剂量-效应关系;该过程可能与姜黄素抑制NF-κB信号通路,从转录水平下调NLRP3炎性小体相关基因的表达相关;更重要的机制可能是直接阻断NLRP3炎性小体的活化、组装及下游分子剪切。

【关键词】 姜黄素 二氧化硅 肺泡巨噬细胞 NLRP3 半胱氨酸蛋白酶-1 白细胞介素 核转录因子-κB 小鼠

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